분야
hwpchapter Ⅵ ; RT - PCR
▶ RT-PCR ◀
1. Introduction
RNA level을 측정할 수 있는 능력은 유전자 발현 연구에 핵심적인 역할을 해왔다.
Northern blot, dot/slot blot, nuclease protection assay 는 전통적으로 mRNA 발현 분석에 사용되었던 방법이었으나, 민감도가 떨어지고, 많은 양의 RNA를 요구하기 때문에 비효율적이었다. 그에 비해 적은 trancript와 한정된 양의 물질로도 작업이 가능한 RT-PCR은 혁신적인 변환이었다. 적은 양의 RNA롤 역전사하는 RT의 능력과 PCR의 DNA를 증폭시키는 힘이 짝을 이룬 방법이다.
RT-PCR 의 장점 ; ① 다방면에 활용, 민감도가 높다.
② 동시에 다양한 sample 비교 가능.
③ 빠른 전환 시간
RT-PCR 의 4 step ;
① RNA isolation
② Reverse transcription
③ PCR Amplification
④ Product analysis
2. RT-PCR (The basic Method)