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[실험노트] Sequencing acrylamide gel & 전기영동

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    [실험노트] Sequencing acrylamide gel & 전기영동에 대한 자료입니다.
    목차
    1. 실험제목 : Sequencing acrylamide gel & 전기영동

    본문내용

    glycinate ion이 sample buffer와 stacking gel 속에 도달하면 pH가 낮아져(pH 6.8) 평형이 zwitterion을 형성하는 방향으로 이동된다. sample과 stacking gel을 통한 mobile ion이 결핍됨으로써 current flow가 감소하게 된다. 따라서 일정한 전류를 유지하기 위하여 chloride ion과 glycine ion 사이에 high localized voltage gradient가 형성되어 SDS-protein complex의 mo gility가 빨라지게 된다.
    stacking gel은 pore size가 커서 빠른 mobility를 방해하지 않는다. SDS-protein complex가 separating gel 경계면에 도달하면 glycine ion이 다시 charge를 띄게 되어 voltage gradient는 사라지고 단백질의 크기에 따라서 분리된다. 이상과 같이 glycine ion과 chloride ion사이에 protein sample이 농축되어 protein band가 compact해지고 resolution이 증가하는 장점을 가지게 된다.

    5. Reagents
    6M Urea
    1X TBE (5X stock)
    6% acrylamide (40% stock) -> 물의 비율로 농도 조절(젤 만들 때 acrylamide 농도 중요) (+cris, aps)


    #분자생물학실험#아크릴아마이드겔#전기영동#DNA관찰실험#실험노트