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[미생물] 아가로스겔전기영동(agarose gel electrophoresis) ＆ Gel elution

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    [미생물] 아가로스겔전기영동(agarose gel electrophoresis) ＆ Gel elution에 대한 자료입니다.
    목차
    1 이동 계면 전기영동 (moving-boundary electrophoresis)
    2 띠 전기영동 (zone electrophoresis)
    3 종이 전기영동
    4 평판 겔 전기영동[polyacrylamide, agarose]
    5 면역 전기영동
    6 전분-겔 전기영동
    7 원판 전기영동
    8 SDS polyacrylamide 전기영동

    본문내용
    평판(slab)에서 동시에 여러 시료와 표준 물질을 분석 할 수 있는 기법.

    Gel의 세공 크기를 조절하여 하전된 물질의 이동속도 결정.

    대표적 Gel 물질: Agarose & Polyacrylamide.



    Polyacrylamide 농도:3~20% 가능

    단백질은 SDS와 polyacrylamide 전기영동(SDS-PAGE)→ 분자량에 따른 분리


    PCR 산물의 확인

    정제한 plasmid의 확인

    DNA 단편의 정제 → gel elution

    단편해석(base sequencing)

    Southern & Northern blot 해석

    Agarose gel로부터 DNA fragment를 자른다.
    2. 1.5ml microcentrifuge tube 에 gel slice를 넣어 무게를 재고 QG buffer를 gel 무게의 3배만큼 첨가.
    3. 50도에서 10min incubate, incubation 동안 매 2~3분마다 vortexing 하면서 mix
    4. Sample에 gel volume의 동령으로 iso-propanol 첨가 & mix
    5. QiAquick column에 sample를 넣고 centrifuge
    6. Collection tube의 여과액을 버리고 column를 다시 collection tube에 끼운다.
    7. Column에 PE buffer 0.75ml 를 첨가하고 column을 2~5분 세워 놓은 후 centrifuge.
    8. Collection tube의 여과액을 버리고 한번 더 centrifuge.
    9. Column을 1.5ml microcentrifuge tube 속에 넣는다.
    10. Column의 membrane 중앙에 EB buffer 40ml 첨가. 1min 세워 놓은 후 centrifuge.
    11. 전기영동으로 확인
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