분야
hwp1. 실험 제목
이번 실험에서는 8주차 실험에서 추출해낸 DNA를 제한 효소를 사용하여 여러 개의 DNA 조각으로 분리한 후, 전기영동을 통하여 원하는 DNA 분자가 유입되었는지를 확인한다.
2. 배경 이론
효소
공급원
인식 서열
잘린 모습
EcoRI
Escherichia coli
5'GAATTC
3'CTTAAG
5'---G AATTC---3'
3'---CTTAA G---5'
PstI[45]
Providencia stuartii
5'CTGCAG
3'GACGTC
5'---CTGCA G---3'
3'---G ACGTC---5'
이번 실험에는 DNA를 제한 효소로 절단하는 과정이 포함되어 있다. 제한 효소는 원래 세균이 침투한 외래 DNA를 변형 및 파괴시키기 위하여 존재하는 효소이다. 그러나 이 제한 효소는 그 세균의 DNA도 절단할 수도 있기 때문에 그것을 방지하기 위해 세균은 자신의 DNA에 메틸화(methylation)을 하는 등의 방법을 통해 자신의 DNA를 보호한다. 제한 효소는 이중 나선 구조로 된 DNA의 회문식 염기서열, 즉 앞으로 읽으나 뒤로 읽으나 염기서열이 같은 모양을 하고 있는 특징적인 염기서열을 인식하여 절단한다. 잘린 후의 DNA 말단의 모양은 두 종류가 있다. 말단이 엇갈리게 잘린 말단을 점착말단(sticky end)라고 하고, 말단이 일자로 잘린 말단을 평활말단(blunt end)라고 한다. 이 말단의 모양은 두 종류가 서로 다른 성격을 나타내므로 필요한 용도에 맞춰 원하는 말단을 얻을 수 있는 제한 효소를 사용해야 한다. 이번 실험에서 사용하는 제한 효소는 두 종류가 있다. EcoR I 효소와 Pst I 효소를 사용하는데 두 효소 모두 점착식 말단(sticky end)를 형성한다는 공통점이 있지만 인식하는 회문식 염기서열이 다르기 때문에 같은 DNA를 자를 때에도 다른 부위를 자른다.
http://www.biovisualtech.com/bvplasmid/pGEX-4T-1.htm
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene?term=ssbp1