[생화학 및 실험] 단백질 정량 Lowry 법
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분야
hwp2. 실험제목 : 단백질 정량 Lowry 법
3. 시약 및 시료
4. 실험 방법
5. 결과
Phenol류와 반응하여 발색하는 시약을 phenol 시약이라 하며 특히 Folin의 시약이 단백질 정량에 자주 이용된다. Folin 시약은 주로 몰리브덴산나트륨(Mo), 텅스텐(W)산 나트륨과 인산으로 만들며 환원제와 반응하여 복잡한 착체인 인몰리브덴산블루를 형성하여 청색을 나타낸다. 단백질 분자 중의 tyrosine(phenol의 일종), tryptophan은 산화되기 쉬워서 환원제로 작용하며 이들 아미노산을 함유하는 단백질은 Folin 시약으로 발색, 정량할 수 있다. Folin의 방법을 biuret법과 조합시켜 감도를 향상시킨 Lowry법도 단백질의 정량에 많이 이용된다.
4. 실험 방법
① 다음과 같이 test tube에 시료와 증류수 reagent C를 넣고 10분간 방치한다.
② 위 test tube에 reagent D 0.5ml을 신속히 가하여 잘 흔든다음 실온에서 10분간 방치한후 600nm에서 흡광도를 측정한다
③ blank의 단백질 함량을 계산한다
④ Std. albumin solution의 흡광도를 기준으로 표준곡선을 그린다음 흡광도로 농도를 환산한다.