미생물 형질전환 판별
분야
hwp실험도구 - X-gal(50mg/ml)20~40㎕, Competent cell(C-cell), LB agar plate, IPTG(839mM) 5~10㎕, 미세원침관, 배양기, 얼음, pipette, spreader
실험방법 - 1.10㎕ 이하의 DNA를 100㎕ C-cell에넣고 tube를 4~5번 기울이거나 가볍게 손끝으로 쳐서 부드럽게 섞는다.
*DNA용액은 C-cell 부피의 5%를 넘지 않는 것이 좋다.
2.얼음에 30분동안 놓아둔다.
3.42℃에서 90초간 heat shock을 준다.
4.얼음에 2~3분간 두었다가 LB 배지 800㎕를 넣고 잘 섞은 후 37℃에서 45분간 진탕배양한다.
5.X-gal(50mg/ml)20~40㎕와 IPTG(839mM) 5~10㎕를 미세원침관에서 섞어 LB 배지 위에 떨어뜨리고 골고루 펴준다.
6.37℃에서 10분간 보관한다.
7.C-cell을 섞은 LB 배지를 pipette으로 따내고 난 후 5번에서 X-gal과 IPTG를 처리한 LB 배지 위에 떨어뜨린 후 spreader로 골고루 펴낸다.
8.37℃배양기에서 plate를 뒤집어서 밤새 배양한다. 12~16시간뒤면 colony를 관찰할 수 있다.
민경희저 대학미생물학 p.238~241
Nancy Trun and Janine Trempy 미생물유전학 p.187
Campbell 생명과학 7판 p.381~383