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[실험방법] RhoA assay protocol

 1  [실험방법] RhoA assay protocol-1
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    • 소개글
    [실험방법] RhoA assay protocol에 대한 자료입니다.
    본문내용
    7. 다 간 조직은 80ul 분주한 E-tube에 모아서 담근다.(ice-rac)
    (전체 다 갈면 tapping 후 약 30s간 vortex->얼음, 녹을 때 까지, 상온에 노출 많이 X)
    8. centrifuge (13.3rpm, 12min, 4℃) -> spectraphotometer ON
    9. 샘플-> 얼음 상층액 60ul 떠서 E-tube에 분주 -> 마개 씌워 액체질소 통에 넣음
    10. 남은 샘플-> 20ul 떠서 P.detc. sol.이 든 E-tube에 넣자마자-> vortex 3S
    => 마지막 샘플 넣고, 1분(timer) 반응, B (ly BF 20ul) + 8개 cuvett (sample 20ul)
    11. OD 측정 (600nm) -> cuvett 넣고 3초 후 측정 => 계산
    ---------------------------------------------------------------------
    plate 30min 전에 상온에 둠 -> 꺼내기 10min 전 샘플도 꺼냄(얼음)
    Binding BF, Rho con. P.(흰), Q.W, ly BF (얼음)
    플라스틱 통 3개, 멀티피펫, 뚜껑 tapping, 뽀삐휴지
    1. plate 꺼내기 5분 전, 샘플(얼음)에 ly BF 넣고, vortex
    2. plate well당 Q.W을 큰 통에 붓고 멀티피펫으로 100ul씩 넣고, 얼음 위에 둠
    3. 농도보정 binding BF : sample=1:1 -> vortex, spin-down 세게
    *binding BF: 완전히 녹았을 때 천천히 떠서 넣어줌. 팁 교환
    4. kit (-) con : ly BF(48ul) + binding BF(60ul) =>얼음
    kit (+) con: ly BF(60ul) + binding BF(60ul) +Rho Con.p.(ly500ul+12ul) =>얼음
    *Rho Con.p.(ly500ul+12ul) : 파우더 완전히 녹여서 씀, vortex->spin 린스=> 1회용
    5. plate 안의 Q.W을 휴지에 쳐서 빼고, 얼음 위에서 plate에 샘플 50ul넣음
    6. timer(30min)->뚜껑 tapping 후 4℃(실내)에 shaking (300rpm/speed 8-9, 30min)
    ----------------------------------------------------
    하고 싶은 말
    대학원 석사과정시 실험했던 RhoA assay protocol입니다.
    실험하실 때 많은 도움 되실겁니다.
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