[화학공학] 단백질의 검정 및 정량

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레포트 > 공학계열
2012.03.19
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소개글

[화학공학] 단백질의 검정 및 정량에 대한 자료입니다.

1.단백질의 구조와 기능

2.단백질의 검정 및 정량법

3.분광 광도계의 원리

본문내용

단백질 구조의 파괴 혹은 구조의 상실 : 대개 비가역적

단백질을 변성시키는 조건들
온도 변화: 온도 상승은 분자운동이 증가하여 수소결합과 소수성 상호작용 깨뜨림
pH의 변화: 아미노산 잔기의 이온화 상태 변화시켜 이온간 인력과 반발력을 방해
환원제: 멜캅토에탄올, 디티오트리에톨 등 환원제의 경우 이황화결합 파괴
계면활성제: 소수성 상호작용, 수소결합, 이온결합 등의 비공유결합 파괴
고농도의 염이나 유기용매
요소 등의 변성제, 중금속 이온
기계적인 자극
자외선, X-선

Identification Method I (Biuret Test)

원리: 두 개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 화합물들은 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리로 처리하면 구리원자와 두 개의 펩티드 사슬에서 오는 네 개의 질소원자간에 보라색의 배위화합물을 형성하여 자주색을 띠게 된다. 보통 이 방법으로는 약 1~10mg의 단백질을 정량 할 수 있다.
미량뷰렛법: 흡광도를 이용하면 약 0.25~2.0mg까지 정량할 수 있도록 감도를 높일 수 있다. 시료에 CuSO₄또는 rochelle염과 CuSO₄를 가하여 540~560nm으로 흡광도를 측정하거나 CuSO₄와 NaOH혼액을 시료에 혼합하여 263nm,310nm의 흡광도를 측정하는 방법이다. 착화합물의 색은 1~2시간동안은 안정하지만, 그 이상의 시간에서는 점점 색도가 증가하므로 주의하도록 한다.

장점: 단백질의 종류에 따라 발색율의 변동이 적고 시약의 조제, 조작이 간단하여 재현성이 좋다.
단점: 다량의 당류가 공존되거나 proline을 함유한 펩티드에서는 점색 이 나빠 흡광도가 낮아진다. 비교적 많은 양(1내지 20mg)의 단백질을 정량 하는데 사용가능하고 소량일 때 불가능하다.

Lambert law

"흡수된 빛의 분율은 통과되는 물질의 두께(b)에 비례한다.”

즉, 빛의 세기가 Ι0인 빛이 두께가 b인 물질층을 통과할 때
빛의 흡수로 인한 빛의 감소는 다음과 같다.

Beer law

“흡수된 빛의 분율은 빛의 농도에 비례한다.”

즉, 위 식에서 가 성립한다.

참고문헌

생명 : 생물의과학 (Life : the science of biology. 7th ed. / Purves, William K.)

생명과학 (Biology. 7th ed. / Campbell, Neil A.]

필수세포생물학 (Essential cell biology. 2nd ed. / Alberts, Bruce)

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http://cafe.naver.com/goondae/126519 - 참고

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